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蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳

09-29

　　3.30%丙烯酰胺（pH≤7.0）：29g丙烯酰胺和1g甲叉双丙烯酰胺，溶于60ml水中，加热至37C溶解，补水至100ml，用棕色瓶贮存于室温，几个月后重新配置。

　　4.10％过硫酸铵（W/V）：1g溶于10ml水中，4C保存数周，尽量现用现配。

　　6.10％SDS。将10gSDS溶于80ml重蒸水中并轻缓搅拌（室温低时需水浴加热溶解），再定容至100ml,室温存放。

　　8．考马斯亮蓝染色液：0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。

　　9．脱色液：90ml甲醇:水（1:1）和10ml冰醋酸配成100ml脱色液

　　10．Tris-甘氨酸电泳缓冲液（pH8.3）：在900ml去离子水中溶解15.1gTris碱，94g甘氨酸，加入50ml10％（W/V）的电泳级SDS贮液，用去离子水补至1000ml量则成5×贮液。

　　2.取30μl蛋白提取液与30μl样品缓冲液混合，于100℃水浴加热3min使蛋白变性，用微量进样器以50μl的量注入点样孔，不加样槽注入样品缓冲液。

　　3．以浓缩胶中100V，分离胶中180V电压进行电泳，至距底线.将电泳后的凝胶取出，置于培养皿中，用蒸馏水冲去残留缓冲液，加入染色液将凝胶完全浸泡其中，放入微波炉内，高火档照射20秒，停留1min，再照射10秒，反复几次至凝胶上色后倒出染色液，用蒸馏水冲去残留染色液，加入脱色液，高火档照射20秒，倒出脱色液，再加入新鲜脱色液照射20秒，重复5－6次，直至背景清晰透明，于凝胶分析仪上成像分析。

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